蜜蜂肠道内生孢子计数

     内生孢子又称芽孢，主要来源于寄生在昆虫的消化道上皮细胞中的微孢子虫，典型的有蜜蜂肠道微孢子虫和家蚕微孢子虫。微孢子虫病感染传播速度快，易出现群体体质衰弱甚至死亡，因此需要对昆虫肠道中的内生孢子进行检测，以达到对微孢子虫病的防控和判断最佳治疗期。

     目前，实验室对于蜜蜂肠道内生孢子的计数只能通过显微镜计数，其过程费时费力，且蜜蜂肠道内生孢子粒径较小，仅 2~3μm，不同人员间镜检结果偏差较大，且浓度偏高时无法直接镜检。定制版 JIMBIO CL 细胞计数仪可替代显微镜镜检，检测浓度范围为 1e5~5e6，能够提高计数效率，给出准确客观的计数结果。

材料：

感染微孢子虫病蜜蜂 、PBS（1X）

孢子悬液纯化制备：

1、取蜜蜂的腹部，置于放入蒸馏水及研磨粉的研钵中研磨

2、研磨均匀后转入 10ml 离心管中，500rpm 低速离心 3min

3、上清转入新的 10ml 离心管，弃沉淀，2000rpm 高速离心 10min

4、弃上清，用清水重新悬浮沉淀，4000rpm 离心 10min

5、取沉淀，用 1mlPBS 溶解沉淀，4℃保存备用

显微镜镜检图：

                                 图 1    10 倍物镜下蜜蜂肠道内生孢子图片

                              图 2    20 倍物镜下蜜蜂肠道内生孢子图片

结果与分析：

从图 1、图 2 可以看出，蜜蜂肠道内生孢子比较小，且浓度较高的时候，样本平铺在血球计数板上非常密集，显微镜下计数困难。

从表 1 中可以看出，定制版 JIMBIO‐CL 测试结果与计数板统计相比，平均浓度基本一致，由于定制版 JIMBIO‐CL 为 10 微升样本全计数，测试结果波动较小，稳定性明显优于进口血球计数板。

注意事项：

1、只能使用 PBS（1X）稀释待测蜜蜂孢子样本；

2、加样前需充分混匀待测样本（可根据样本总量选择不同规格液枪吹打）；

3、为保证检测结果的稳定性，待检测样本总量不要低于 100 微升。

致谢：

感谢福建农林大学蜂学院郭睿老师课题组和黄伟峰老师课题组提供样本，并共同完成应用开发